La infección de Salmonella y Listeria son asociadas a enfermedades transmitidas por alimentos. La salmonelosis y Listeriosis continúa siendo una significativa preocupación de salud pública a nivel global. Los métodos tradicionales para la detección de estos patógenos, son lentos, tardando hasta 4-5 días para su detección.
El Sistema 3M™ Molecular Detection System es una alternativa de una perfecta combinación de amplificación isotérmica y bioluminiscencia que provee resultados en tiempo real.

El ensayo 3M™ Molecular Detection Assay Salmonella, Listeria spp y Listeria monocytogenes fueron desarrollados para la detección rápida de estos contaminantes en muestras enriquecidas.

El ensayo utiliza la amplificación isotérmica de secuencias de ácido nucleicos con alta especificidad, eficiencia y rapidez, mientras que la bioluminiscencia detecta dicha amplificación y los resultados presuntivos son reportados en tiempo real mientras que los negativos no tardaran más de 75 minutos.

Objetivo:
Realizar una evaluación preliminar del funcionamiento 3M Molecular Detection System para la detección de Salmonella spp, Listeria spp y Listeria monocytogenes en muestras de variadas matrices lácteas provenientes de diferentes empresas lácteas de la región centro santafesina, contrastando su exactitud contra la metodología de referencia (norma ISO 6579: 2002-Amendment 2003).

Método:
Un total de 129 muestras fueron analizadas provenientes de 4 distintas empresas lácteas de la región- 53 fueron inoculadas artificialmente con Salmonella Typhimurium ATCC 14028 o Listeria monocytogenes ATCC 19114 (Tabla 1).

Tabla 1: Contaminación de Muestras

Para Salmonella spp., las muestras fueron enriquecidas con 3M Buffered Peptone ISO según la tabla 2.

Para Listeria spp. y Listeria monocytogenes las muestras fueron enriquecidas con 3M Demi-Fraser Broth Base segun tabla 3.

Tabla 2: para Salmonella spp, las muestras fueron enriquecidas con 3M Buffered Peptona ISO.

Tabla 3: para Listeria spp y Listeria monocytogenes las muestras fueron enriquecidas con 3M Demi-Fraser

Un total de 47 muestras fueron analizadas Salmonella spp., 36 para Listeria spp. y 46 de Listeria monocytogenes.
Estas fueron analizadas según el método 3M Molecular Detection System, según el protocolo del proveedor (figura 1) y método de referencia ISO 6579:2002/Amd 1:2007 or ISO 11290-1:1996/Amd 1:2004.

Figura 1: Proceso 3M™ Molecular Detection Assay

Resultados:
Todas las muestras contaminadas resultaron positivas en 3M Molecular Detection System a los 15 minutos de corrida y confirmado a positivo por método de referencia. Las muestras no inoculadas resultaron negativas en 3M Molecular Detection System y confirmadas negativas vía el método de referencia (tabla 2 y 3). Se utilizó un control de matriz para cada una de ellas verificando la posible presencia de inhibidores que dificulten la amplificación del ADN arrojando este valor válido para la corrida en todas las matrices trabajadas.

Tabla 2: Comparación de resultados para la detección de Salmonella spp en diferentes matrices realizadas por 3M™ Molecular Detection Assay Salmonella vs Método de referencia.

Tabla 3: Comparación de resultados para la detección de Listeria spp y Listeria monocytogenes en diferentes matrices en 3M™ Molecular Detection Assay Listeriaspp & Listeria monocytogenes vs Método de referencia.

Tabla 4: 3M™ Molecular Detection System Inclusividad/Exclusividad

Resultados:
Los resultados indicaron 100% de inclusividad y exclusividad sin falsos positivos o negativos. Una excelente correlación fue observada con respecto a metodologías ISO.

Adicionalmente este trabajo demostró el uso de este método molecular permitiendo resultados rápidos, sensibles y específicos. Estas características pueden aplicarse en la industria láctea para la detección de patógenos en su rutina diaria, permitiendo una liberación segura y rápida.

Conclusión:
No se observaron diferencias significativas entre el sistema 3M™ de Detección Molecular para la detección de Salmonella, Listeria spp y Listeria monocytogenes en comparación con las metodologías de referencia ISO 6579:2002 e ISO 11290-1

Laboratorio de Microbiología de Alimentos, Centro de Investigación Tecnológica de la Industria Láctea, Rafaela, Argentina: Mónica Di Maria, Mariela Cortes, Lorena Di Ninni, Liliana Colombo. 3M Food Safety, Argentina: Luciana Maiorano

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