Screening de 22 antibióticos comunes utilizando una columna de HPLC/UHPLC Kinetex® PS C18
Zeshan Aqeel, Jeff Layne y Ryan Splitstone Phenomenex,
Inc., 411 Madrid Ave, Torrance CA 90501 USA
Screening de 22 antibióticos comunes que demuestra la selectividad única de esta fase reversa y el rendimiento cromatográfico mejorado para bases utilizando una columna de HPLC/UHPLC Kinetex® PS C18
Resumen
La Kinetex PS C18 es una columna clasificada USP L1, que proporciona una selectividad polar/hidrofóbica única, y es 100% estable al agua. La columna demuestra una selectividad y una forma de pico mejoradas para compuestos básicos en condiciones típicas de fase reversa. Además, el soporte sólido posee una morfología de partículas Kinetex core-shell (superficialmente porosa) que proporciona una eficiencia de columna ultra-alta en cualquier sistema de HPLC o UHPLC.
Las condiciones de corrida elegidas fueron un gradiente de acetonitrilo con 0.1% de ácido fórmico como solvente orgánico fuerte y agua con 0.1% de ácido fórmico como solvente débil. Se usó un caudal de 0,5 ml / min y el horno de columna se ajustó a temperatura ambiente (25° C).
Introducción
En esta aplicación, se analizaron 22 antibióticos para demostrar la selectividad multimodal única y rendimiento cromatográfico mejorado para bases polares de la columna Kinetex PS C18 para HPLC/UHPLC. La selectividad única y los beneficios de rendimiento se compararon con otra columna C18 de fase reversa de estructura de partículas similar, superficialmente porosa (núcleo sólido) bajo condiciones idénticas del sistema y del método. Los antibióticos seleccionados fueron elegidos debido a las dificultades presentadas cuando se analizaron en condiciones de fase reversa estandar. Las dificultades se deben principalmente a una amplia variedad de analitos, alta polaridad, y se demuestran por la amplia gama de compuestos de valores LogP desde -0.52 hasta 2.32. Además, varios de estos antibióticos fueron seleccionados porque son compuestos polares básicos.
Tras el análisis de la mezcla de 22 antibióticos, se realizaron tres comparaciones de antibióticos individuales utilizando ciprofloxacina, florfenicol y difloxacina para demostrar mejor el rendimiento de la forma del pico relativo y la selectividad de la Kinetex PS C18. Para comparación, también se realizó una corrida en una columna C18 de núcleo sólido bajo condiciones de método idénticas para los tres antibióticos individuales, para validar las diferencias de selectividad de la fase estacionaria.
Materiales y Métodos
Los estándares de referencia analíticos para los 22 antibióticos y los compuestos individuales (ciprofloxacina, florfenicol y difloxacina) se obtuvieron a través de Sigma-Aldrich® (Saint Louis, MO). Se usó un sistema de HPLC Agilent® 1200 Infinity para esta investigación y se usó un SCIEX ™ 4000 MS / MS para la detección.
Discusión
En la Figura 1, la Kinetex PS C18 mostró una mayor selectividad y varias mejoras de forma de pico para los 22 antibióticos básicos polares en comparación a una columna core-shell similar con una fase estacionaria C18.
La carga superficial positiva y el ligando C18 de la Kinetex PS C18 proveen mecanismos de interacción multimodo que generan las mejoras cromatográficas y la separación de los 22 antibióticos polares.
Bajo las condiciones de corrida y fase móvil compatibles con el detector MS utilizado en este ejemplo, varios de los antibióticos fueron completamente o parcialmente ionizados químicamente, lo que puede contribuir a problemas de forma de pico. En estos casos, la carga superficial positiva de la Kinetex PS C18 utiliza la repulsión iónica para ofrecer una mejora de forma de pico de compuestos polares básicos.
Conclusión
Luego de la mezcla de 22 antibióticos, fueron evaluadas comparaciones de compuestos individuales con los antibióticos ciprofloxacina, florfenicol, y difloxacina para demostrar la mejor la forma de pico relativa, el rendimiento y la selectividad de la Kinetex PS C18. Como antes, el rendimiento de la nueva fase estacionaria se comparó con una C18 con una morfología de partículas similar. La figura 2 muestra las superposiciones cromatográfícas compensadas para ayudar en la comparación visual relativa de la forma de pico cromatográfico bajo condiciones idénticas. En los tres ejemplos, se muestra una mejora en la forma de pico en la Kinetex PS C18
