Recomendaciones para la limpieza del material de vidrio
Las buenas prácticas de laboratorio exigen el uso de piezas de vidrio limpias, dado que, aunque se tomen los mayores recaudos al completar los procesos, el empleo de instrumentos de vidrio sucios puede arrojar resultados erróneos. En todo momento, resulta fundamental que el material de vidrio se encuentre física y químicamente limpio y, en muchos casos, debe estar estéril. El material no debe tener ningún residuo de grasa. El criterio más seguro de limpieza se logra humedeciendo la superficie de manera uniforme con agua destilada. Esto resulta especialmente importante en el material de vidrio empleado para medir el volumen de los líquidos. La grasa y otros materiales contaminantes impiden que se pueda humedecer el vidrio de forma uniforme. A su vez, esto altera el volumen de residuo que se adhiere a las paredes del recipiente de vidrio y, por lo tanto, afecta el volumen del líquido medido o suministrado. Además, en el caso de las pipetas y buretas, se distorsiona el menisco y no se pueden realizar los ajustes correctos. Es posible que la presencia de pequeñas cantidades de impurezas también altere el menisco.
Consideraciones de seguridad
Al lavar artículos de vidrio, se deben utilizar gafas protectores y guantes de seguridad anti-deslizantes y resistentes a productos químicos. Dependiendo de las soluciones de limpieza y detergentes empleados, es posible que sea necesario utilizar un delantal y una campana extractora. Siempre consulte con el Departamento de Seguridad antes de utilizar soluciones cáusticas.
Limpieza de artículos de vidrio PYREX®
Es importante lavar el material de vidrio tan rápido como sea posible después de su uso. Cuanto más tiempo permanezca sucio, más difícil resultará limpiarlo. Si no es posible realizar una limpieza profunda de inmediato, desarme el material de vidrio y déjelo reposar en agua. Esto es muy importante en tapones y válvulas de vidrio esmerilado. Si no se limpian de forma inmediata, quizás sea imposible eliminar el residuo más tarde.
No sobrecargue las piletas de lavado, las máquinas lavadoras o las cubetas de enjuague. Las cubetas de caucho y los tapetes de mesa contribuyen a reducir potenciales roturas y consecuentes lesiones. La mayoría de los nuevos artículos de vidrio presentan una reacción levemente alcalina. Para realizar pruebas químicas de precisión, el nuevo material de vidrio debe remojarse en agua ácida por varias horas (una solución de ácido clorhídrico o ácido nítrico al 1%) antes del lavado.
Agentes para la limpieza del material de vidrio
Para el lavado del material, se puede utilizar jabón, detergente o polvo de limpieza (con o sin abrasivos). El agua debe estar caliente. Si el material se encuentra extremadamente sucio, se obtendrán mejores resultados utilizando un polvo de limpieza con una muy leve acción abrasiva. El abrasivo no debe rayar el vidrio.
Durante el lavado, todas las piezas de vidrio deben limpiarse meticulosamente con un cepillo. Esto significa que es necesario contar con un equipo completo de cepillos: cepillos para tubos de ensayo grandes y pequeños, para buretas, embudos, tubos graduados y distintos tamaños de matraces y frascos. Se recomienda el uso de cepillos con mango de madera o de plástico, dado que no rayarán ni desgastarán la superficie de vidrio. Los cepillos giratorios accionados a motor resultan de gran utilidad para procesar un gran número de tubos o frascos.
No es recomendable utilizar cepillos de limpieza altamente gastados, dado que el centro de los mismos puede golpear el vidrio. Esto podría causar graves rayones. El vidrio rayado tiene más probabilidad de romperse durante un experimento. Cualquier marca en la superficie uniforme de un utensilio de vidrio es un punto de ruptura potencial, especialmente cuando la pieza se somete a calor o se emplea en aplicaciones al vacío. No permita el contacto del ácido con la pieza de vidrio antes de eliminar por completo el detergente (o el jabón). Si esto llegara a suceder, es posible que se forme una película de grasa.
Otros métodos de limpieza
Advertencia. Los métodos que se explican a continuación pueden provocar graves lesiones en los ojos, las membranas mucosas, la piel y los pulmones, y solo deberían ser realizados por personal capacitado en su correcto uso y completamente equipado con guantes de seguridad anti-deslizantes y resistentes a productos químicos, gafas protectoras, bata de laboratorio, delantal y, de ser necesario, una campana extractora.
Si el material de vidrio se torna opaco o sucio, o contiene materia orgánica coagulada, deberá lavarse con soluciones de limpieza más potentes, que resultan potencialmente peligrosas, dado que contienen ácidos o bases. Es posible que algunos precipitados especiales deban ser removidos con ácido nítrico, agua regia o ácido sulfúrico fumante. Estas se consideran sustancias muy corrosivas y solo deben utilizarse cuando sea necesario. El ácido crómico, disuelto en ácido sulfúrico concentrado es también un potente agente de limpieza. Sin embargo, no se recomienda el uso de otras soluciones de limpieza a base de cromatos en muchos laboratorios de investigación, ya que los iones de cromo son altamente tóxicos para el medio ambiente y presentan un grave problema en la disposición de residuos, incluso en pequeñas cantidades.
Eliminación de grasa
La mejor forma de eliminar la grasa es hervirla en una suave solución de carbonato de sodio. También se puede emplear acetona o cualquier otro disolvente para grasa. No se deben usar álcalis fuertes. La grasa de silicona puede eliminarse fácilmente remojando el tapón o el barril en decahidronaftaleno tibio durante 2 horas.
También es posible eliminar la grasa de las juntas esmeriladas frotando con una toalla de papel mojada en acetona o en cualquier otro disolvente que sea adecuado. Utilice una campana extractora para minimizar la exposición a vapores.
Enjuague y escurra el material de vidrio desgrasado con acetona, o utilice ácido sulfúrico fumante por 30 minutos. Asegúrese de enjuagar el material hasta quitar todos los agentes de limpieza.
Enjuague
Es fundamental eliminar cualquier resto de jabón, detergente u otro líquido de limpieza del material de vidrio antes de volver a utilizarlo. Esto es especialmente importante en el caso del detergente, ya que leves rastros del mismo pueden interferir con las aplicaciones serológicas y de cultivo celular.
Después de limpiar, enjuague las piezas de vidrio con agua corriente. Al enjuagar los tubos de ensayo, tubos graduados, matraces y otros recipientes similares con agua corriente, permita que ésta se introduzca y cubra la pieza durante un breve período, luego llene parcialmente cada artículo con agua, sacúdalo con fuerza y vacíelo al menos seis veces. La mejor forma de enjuagar las pipetas y buretas es conectando un tubo de caucho al grifo y luego conectando el extremo de las pipetas o buretas a una manguera, permitiendo que el agua circule a través de ellas. Si el agua del grifo es muy dura, se recomienda emplear un desionizador o un sistema de osmosis inversa con anterioridad. Luego, enjuague el material de vidrio en una pileta grande con agua de alta pureza o destilada. Para finalizar, enjuague cada utensilio con agua de alta pureza. Para conservar el agua, utilice un bidón de cinco galones (19 litros) como reservorio. Almacénelo en un estante cercano al área de limpieza. Conecte un sifón y utilícelo para reponer el reservorio con agua destilada usada.
Limpieza de materiales de vidrio PYREXPLUS®
El material de vidrio PYREXPLUS está revestido con una resistente capa de vinilo plástico transparente. Este revestimiento, que se aplica en la parte externa del recipiente, contribuye a prevenir la abrasión de la superficie exterior. Además, ayuda a minimizar la pérdida de contenido, y retiene los fragmentos de vidrio en caso de que el recipiente se rompa.
Para realizar su limpieza manual o automática, se puede utilizar cualquier detergente no abrasivo para material de vidrio. Si se emplea una lavadora o un secador de material de vidrio, es importante asegurar que la temperatura de secado no exceda los 110ºC (230ºF). Se debe minimizar la exposición al calor seco.
Evite el uso de cepillos o toallas de limpieza que podrían ocasionar abrasión en el vidrio o dañar el revestimiento. En caso de utilizar una solución de limpieza con ácido crómico, minimice el contacto de la solución con el revestimiento.
El material de PYREXPLUS puede colocarse en autoclave varias veces, con líquido o con esterilización de ciclo seco, que no aplica vacío o lo hace a un bajo nivel (menos de 5 pulgadas de mercurio).
El tiempo de esterilización no debe exceder los 15 minutos a 121ºC (250ºF). El tiempo de secado no debe exceder los 15 minutos a 110ºC (230ºF). Se debe verificar la temperatura real de la cavidad del autoclave para asegurar que la misma no exceda la temperatura de esterilización y de secado recomendada. Los recipientes no deben entrar en contacto durante el autoclave.
Es preferible utilizar un ciclo de enfriamiento lento para el venteo en lugar de uno rápido, a fin de reducir la formación de burbujas de aire entre el vidrio y el revestimiento. Si el revestimiento se torna opaco debido a la humedad disuelta, deje secar durante la noche a temperatura ambiente, o caliéntelo por un breve período a 110ºC (230ºF).
Limpieza de materiales de frita PYREX®
Previo a su uso, todo filtro nuevo de frita debe lavarse mediante aspiración con ácido clorhídrico caliente y luego se lo debe enjuagar con agua. Este tratamiento eliminará cualquier partícula suelta de material extraño, como polvo. Se recomienda limpiar todos los filtros de frita PYREX tan pronto como sea posible después de utilizarlos. Esto prolongará su vida útil.
Se pueden eliminar muchos precipitados de la superficie del filtro enjuagando el lado reverso con agua a presión sin exceder las 15 lb/pulg2. También resulta efectivo pasar agua por el lado reverso del filtro con una bomba de vacío. Algunos precipitados tienden a obturar los poros del filtro de frita, y es posible que se necesiten soluciones de limpieza especiales (consulte la Tabla 1).
Tabla 1. Soluciones de limpieza recomendadas para el material de frita PYREX
Limpieza de portaobjetos y cubreobjetos Corning®
Es fundamental que los portaobjetos y cubreobjetos empleados en la preparación de frotis de sangre, frotis bacteriológico o cultivos celulares, estén perfectamente limpios y sin rayones.
Los portaobjetos deben lavarse, colocarse en ácido acético glacial durante 10 minutos, enjuagarse con agua destilada y secarse con toallas de papel o con un paño limpio.
Antes de usar, lavar con alcohol y secar con un paño. Luego del tratamiento con ácido y del enjuague, se pueden colocar los portaobjetos en un recipiente ancho cubierto de alcohol. Si es necesario, retire del recipiente y seque con un paño.
Limpieza de buretas PYREX
Retire el tapón o la punta de caucho y lave la bureta con detergente y agua. Enjuague con agua del grifo hasta eliminar toda la suciedad. Luego, enjuague con agua destilada y seque.
Limpie el tapón o la punta de caucho por separado. Antes de colocar un tapón de vidrio en la bureta, lubrique la junta con lubricante para tapones. Solo utilice una pequeña cantidad de lubricante. Las buretas deben estar siempre tapadas si no están en uso.
Limpieza del material de vidrio PYREX para cultivo celular
El material de vidrio para cultivo celular debe primero remojarse, luego lavarse y enjuagarse repetidas veces con agua de grifo y con agua de alta calidad, es decir, purificada mediante destilación, desionización u ósmosis inversa. Se debe prestar especial atención a la fuente de agua utilizada durante el proceso de lavado. Por lo general, los caños de cobre son una fuente de iones metálicos tóxicos para los sistemas de cultivo celular. Para eliminar este problema, pueden reemplazarse por caños de plástico o de acero inoxidable que resulten adecuados. Otra fuente de iones metálicos tóxicos puede ser el sistema de calentamiento de agua caliente que se utiliza en el lavado de las piezas de vidrio. Para resolver esto, se puede emplear un sistema separado de agua caliente revestido en vidrio, ubicado cerca del área de lavado de materiales de vidrio.
Una fuente de iones tóxicos de metal pesado que se ignora con frecuencia son los frascos de almacenamiento de medios, previamente utilizados para contener soluciones de tinción empleadas en microscopía electrónica, que poseen tetracloruro de osmio, acetato de uranilo o nitrato de plomo. Estos iones de metal pueden unirse fuertemente al vidrio y no se eliminan durante la limpieza a menos que se utilicen agentes de limpieza con ácido concentrado. Al guardar medios en los frascos, los iones de metal comenzarán a liberarse lentamente de la superficie de vidrio, provocando toxicidad celular. Se recomienda el uso de frascos descartables para guardar estas soluciones.
Por lo general, solo se recicla el material de vidrio de borosilicato (como PYREX). El vidrio común o el vidrio flint debe utilizarse solo una vez y luego se los debe descartar; el uso repetido del vidrio común puede provocar la lixiviación de los materiales tóxicos en las soluciones o cultivos. Es fundamental limpiar y enjuagar en profundidad el material de vidrio. Si un servicio central de lavado de piezas de vidrio no logra brindar la atención necesaria al material de vidrio para cultivo celular, entonces dicho material deberá lavarse en los laboratorios individuales.
El uso de material plástico descartable puede eliminar o reducir este problema en gran medida.
Limpieza de tubos para cultivo PYREX
Los tubos para cultivo previamente utilizados deben esterilizarse antes de la limpieza. El mejor método para la esterilización es mediante autoclave durante 30 minutos a 121°C (presión de 15 lb.).
El medio que se enfría y solidifica debe retirarse mientras los tubos están en caliente. Después de vaciar los tubos, lave con detergente y agua, enjuague profundamente con agua corriente, enjuague con agua destilada, coloque en una cubeta y deje secar.
Si los tubos se llenarán con un medio que se esterilice por autoclave, no tape los tubos hasta añadir el medio. Así, tanto el medio como los tubos se esterilizan en autoclave. Asegúrese de que las tapas puedan colocarse en autoclave. Las tapas que poseen revestimiento en papel no deben colocarse en autoclave.
Si los tubos se llenarán con un medio estéril, tape y esterilice los tubos en el autoclave o con aire caliente antes de añadir el medio. Corning también ofrece una amplia gama de tubos de vidrio y plástico descartables que eliminan la necesidad de limpieza.
Limpieza de pipetas
Coloque las pipetas con su extremo hacia abajo en un cilindro o frasco alto con agua inmediatamente después de su uso. No las deje caer dentro del frasco, dado que se pueden romper los extremos, quedando inutilizadas para mediciones precisas. Un disco de algodón o lana de vidrio en el fondo del frasco ayuda a prevenir la rotura de los extremos. Asegúrese de que el nivel de agua sea suficiente para sumergir la parte más grande o la totalidad de cada pipeta. Cuando sea conveniente, las pipetas deben escurrirse y colocarse en un cilindro o frasco con detergente o, si se encuentran demasiado sucias, en un frasco con solución para limpieza a base de ácido crómico. Después de permanecer en remojo por varias horas, o durante toda la noche, escurra la pipeta y enjuáguela con agua de grifo hasta remover toda la suciedad. Remoje las pipetas en agua destilada durante al menos 1 hora. Retire del agua destilada, enjuague, seque la parte exterior con un paño, quite el agua remanente y seque.
En los laboratorios que utilizan grandes cantidades de pipetas por día, es conveniente utilizar una lavadora automática de pipetas. Algunos de estos dispositivos, fabricados en metal, son bastante sofisticados y pueden conectarse mediante accesorios directamente al suministro de agua fría y caliente. Los que están fabricados en polietileno son más sencillos y se pueden conectar al suministro de agua mediante una manguera de caucho. Se pueden utilizar cubetas y frascos de polietileno para mojar y enjuagar las pipetas en solución de limpieza a base de ácido crómico. También pueden emplearse secadores metálicos eléctricos para pipetas.
Después del secado, las pipetas deben colocarse en un cajón libre de polvo. Se recomienda envolver las pipetas serológicas y bacteriológicas en papel o colocarlas en cubetas para pipetas y esterilizarlas en el esterilizador de aire seco a 180°C durante 2 horas.
Las pipetas que se emplean para la transferencia de material infeccioso deben tener un tapón de algodón en la parte superior antes de la esterilización. El tapón de algodón evitará que el material a medir ingrese accidentalmente al dispositivo de pipetas. Corning también ofrece una línea completa de pipetas estériles descartables de plástico y de vidrio listas para usar sin necesidad de su limpieza y esterilización posterior.
Limpieza de pipetas serológicas PYREX
Después de su uso, las pipetas serológicas se deben enjuagar minuciosamente con agua fría de grifo, agua destilada, alcohol o acetona.
Luego, se deben secar por aspiración. (No sople aire dentro de las pipetas, dado que esto condensará la humedad en el interior de las mismas).
Se debe emplear una solución de limpieza para remover partículas de sangre coagulada o suciedad. En algunos casos será suficiente un tipo de solución, mientras que otros casos requerirán un agente de limpieza más potente. Se recomienda llenar la pipeta con la solución de limpieza y dejarla reposar durante la noche. Se puede utilizar hipoclorito de sodio (lejía para ropa) o detergente. El peróxido de hidrógeno también resulta útil. En los casos difíciles, se puede emplear ácido nítrico concentrado. Quizás sea necesario aflojar algunas partículas con un alambre fino o hilo metálico. Tenga cuidado de no rayar el interior de la pipeta.
Siliconización del material de vidrio
La siliconización del vidrio produce una superficie hidrofóbica, lo que previene que las células y otros materiales se adhieran a la superficie del vidrio. La siliconización (también llamada proceso de silanización) del vidrio consiste en revestir la superficie limpia y seca del vidrio con organopolisiloxano altamente reactivo, que libera gases tóxicos en su reacción. El tratamiento siempre debe realizarse en una campana de extracción y con el equipo de protección personal adecuado de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Enjuague, secado y almacenamiento del material de vidrio
Es importante ser cuidadoso al enjuagar o lavar pipetas, cilindros o buretas, y evitar que las tapas caigan en la pileta de lavado o golpeen contra el grifo. La mayoría de las roturas se producen de este modo. Los tubos de ensayo, tubos de cultivo, matraces y otros artículos de vidrio deben colgarse con broches de madera para su secado, o se deben colocar hacia abajo en bateas para su secado al aire. Otra alternativa es colocarlos en cubetas y secarlos en horno. La temperatura de secado no debe superar los 140°C. (Nunca aplique el calor directamente sobre el material de vidrio vacío empleado para mediciones volumétricas. Dicho artículo debe secarse a temperaturas que no excedan los 80°C o 90°C). Antes de colocar los artículos de vidrio en la cubeta, recubra la base de la misma con una toalla plegada limpia o un paño limpio. Esto evita que la boca de los tubos se ensucie.
Deje secar las buretas, pipetas y cilindros en posición vertical sobre una toalla plegada. Proteja el material de vidrio del polvo. Para hacerlo, se recomienda colocar un tapón de algodón o corcho, o encintar con papel grueso la boca del recipiente, o colocar el material de vidrio en un gabinete libre de polvo.
Para almacenar, coloque los artículos en estantes diseñados especialmente para los mismos. Asegúrese de que no estén en contacto unos con otros para evitar daño mecánico involuntario. No coloque los artículos de vidrio sobre el borde de los estantes.
No almacene líquidos alcalinos en buretas o matraces volumétricos. Los tapones y las válvulas pueden atascarse.
